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產(chǎn)品簡介：

Cell Counting Kit-8，簡稱CCK-8試劑盒或CCK8試劑盒，是一種基于WST-8而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

產(chǎn)品特點：

※使用水溶性四唑鹽與水溶性甲臜染料，因此無需DMSO換液操作步驟。

※與其他水溶性四唑鹽法（XTT，MTS）相比，靈敏度更高的同時毒性更低

※方便：單一溶液無需其他試劑

※酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響

儲存和穩(wěn)定性:

4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。

試劑盒組成:

注意事項：

※本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶的催化反應，因此當檢測體系中有還原性物質(zhì)存在時，會干擾測定。

※由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)問題。

※用酶標儀檢測之前，要確保每個孔內(nèi)沒有氣泡，否則會影響測定。

※加入 CCK-8 試劑后，培養(yǎng)時間要根據(jù)不同的細胞種類、數(shù)量和細胞狀態(tài)來確定。通常情況下， 相同的培養(yǎng)時間，懸浮細胞和貼壁細胞相比，吸光度較低，可以延長培養(yǎng)時間或者增加細胞數(shù) 量。此外，白細胞可能也需要較長的培養(yǎng)時間。

※本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

※為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：

1.       使用與酶標儀相匹配的 96 孔培養(yǎng)板。通常進行細胞增殖實驗時，每孔加 100 微升 2000 個細胞，而測定細胞毒性時，每孔加100微升5000個細胞，應根據(jù)所用的細胞類型、增殖速度進行調(diào)整。注意設置 2-3個重復孔，并按照實驗需要設置實驗組與對照組，按要求進行培養(yǎng)并給予特定的藥物刺激。

2.       處理結(jié)束后，向每孔加入 10μl CCK-8試劑（如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升CCK-8溶液）。可以用加了相應量細胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用的藥物會干擾檢測，需設置加了相應量細胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。

3.       37 oC培養(yǎng)箱內(nèi)孵育0.5-4小時，培養(yǎng)時間的長短依據(jù)細胞種類、數(shù)量、活力等情況而定，大多數(shù)情況孵育1小時即可。初次實驗者，可以選擇幾個不同的培養(yǎng)時間點如 0.5h, 1h, 2h, 4h 用酶標儀進行檢測，以便選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。

4.       在 450nm 測定OD吸光度并進行計算。如無 450nm 濾光片可用 430-490nm 范圍內(nèi)的濾光片。注意：若樣品為渾濁的細胞懸液時，可以選用大于 600nm 的波長，如 650nm 作為參比波長進行雙波長測定。 注意：用酶標儀檢測之前，要確保每個孔內(nèi)沒有氣泡，否則會影響測定。

5.       結(jié)果判斷：細胞增殖或毒性＝100％ × (OD_實驗－OD_空白) / (OD_對照－OD_空白)

OD_實驗：實驗孔(含有細胞的培養(yǎng)基、CCK-8、待測物質(zhì))

OD_空白：空白孔(不含細胞和待測物質(zhì)的培養(yǎng)基、CCK-8)

OD_對照：對照孔(含有細胞的培養(yǎng)基、CCK-8、沒有待測物質(zhì))