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活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒（紅色熒光）

更新：2023/10/11 9:16:43

中文名：	活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒（紅色熒光）	說明書下載	暫無
英文名：	Reactive Oxygen Species Assay Kit
描述：	活性氧檢測(cè)試劑盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）利用熒光探針 DHE 進(jìn)行活性氧檢測(cè)。DHE 可自由透過活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞質(zhì)中呈藍(lán)色熒光，被細(xì)胞內(nèi)的 ROS 氧化后形成氧化乙啶摻入染色體 DNA 中，使細(xì)胞核呈現(xiàn)明亮的紅色熒光。在激發(fā)波長(zhǎng) 535nm，發(fā)射波長(zhǎng) 610nm 附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測(cè)熒光強(qiáng)度，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。具有背景低、靈敏度高、線性范圍寬、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，是一種快速簡(jiǎn)便的組織或培養(yǎng)活細(xì)胞中 ROS 經(jīng)典檢測(cè)方法。

訂購(gòu)信息

貨號(hào)	規(guī)格	價(jià)格	品牌
G2706-1	0.2ml	520	GBCBIO
G2706-2	0.5ml	960	GBCBIO
G2706-3	1ml	1580	GBCBIO

產(chǎn)品介紹

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
活性氧檢測(cè)試劑盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）利用熒光探針 DHE 進(jìn)行活性氧檢測(cè)。DHE 可自由透過活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞質(zhì)中呈藍(lán)色熒光，被細(xì)胞內(nèi)的 ROS 氧化后形成氧化乙啶摻入染色體 DNA 中，使細(xì)胞核呈現(xiàn)明亮的紅色熒光。在激發(fā)波長(zhǎng) 535nm，發(fā)射波長(zhǎng) 610nm 附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測(cè)熒光強(qiáng)度，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。具有背景低、靈敏度高、線性范圍寬、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，是一種快速簡(jiǎn)便的組織或培養(yǎng)活細(xì)胞中 ROS 經(jīng)典檢測(cè)方法。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
 適用范圍：貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、新鮮動(dòng)物組織
 工作波長(zhǎng)：最佳激發(fā)波長(zhǎng) 480-535nm，最佳發(fā)射波長(zhǎng) 590-610nm
 所需設(shè)備：流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)等
儲(chǔ)存和穩(wěn)定性:
-20℃避光凍存。本試劑盒自訂購(gòu)之日起一年內(nèi)有效。
試劑盒組成:
貨號(hào) G2706-1 G2706-2 G2706-3
DHE Solution(5mM) 0.2ml 0.5ml 1ml
說明書 1份 1份 1份
注意事項(xiàng)：
 開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集于管底，避免開蓋時(shí)染液損失。
 要設(shè)有無DHE孵育的對(duì)照，即不加探針，只用0.01M PBS重懸的細(xì)胞。
 熒光探針標(biāo)記后，一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，以避免背景升高。多次清洗時(shí)注意操作規(guī)范，避免將細(xì)胞洗掉。
 對(duì)于藥物處理（孵育）時(shí)間較短的細(xì)胞（2小時(shí)以內(nèi)、也有建議 4小時(shí)以內(nèi)），可以先用熒光染料進(jìn)行標(biāo)記，后用藥物刺激細(xì)胞后。對(duì)于藥物處理時(shí)間較長(zhǎng)的細(xì)胞（超過 4 小時(shí)或 6 小時(shí)以上），建議先用藥物處理（刺激）細(xì)胞，后用探針標(biāo)記。
 DHE 在光照和空氣中易被氧化，保存和操作中應(yīng)注意避光。
 對(duì)不同的細(xì)胞和組織，應(yīng)選擇合適的孵育時(shí)間和濃度，以觀察ROS的變化。
 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

使用說明：

一、細(xì)胞樣本：

A：收集細(xì)胞，進(jìn)行活性氧測(cè)定

1 細(xì)胞收集：

懸浮細(xì)胞：2000rpm，離心5min，收集沉淀，用 0.01M PBS 或無血清培養(yǎng)液洗滌2次，1000rpm，離心5min，棄上清，取細(xì)胞沉淀；

貼壁細(xì)胞：吸去培養(yǎng)液，用0.01M PBS 或無血清培養(yǎng)液反復(fù)吹打，使細(xì)胞層全部進(jìn)入PBS 或培養(yǎng)液中，收集細(xì)胞懸液，用0.01M PBS 或無血清培養(yǎng)液洗滌2次，1000rpm，離心5min，棄上清，取細(xì)胞沉淀；

2 加入DHE探針：用稀釋好的 DHE熒光探針重懸細(xì)胞沉淀，一般情況下，細(xì)胞密度要求1*10⁶-2*10⁷/ml，推薦探針初始工作濃度為10 μM（DHE 工作濃度可在 1μM~100 μM 范圍內(nèi)，需進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最適濃度）。

3 37 ℃孵育細(xì)胞10-90分鐘。通常情況下，10-30分鐘即可。

注意：孵育時(shí)間長(zhǎng)短與細(xì)胞類型、刺激條件、DHE 濃度等有關(guān)�？梢悦扛�5min顛倒混勻一下，使探針與樣本充分接觸。

4 1000g，離心5min，去上清收集細(xì)胞沉淀，用 PBS 緩沖液洗滌 2 次，重懸細(xì)胞。

5 進(jìn)行熒光檢測(cè)，以熒光度數(shù)值表示結(jié)果。

B：不收集細(xì)胞，直接將探針加入培養(yǎng)基測(cè)定

1. 加入DHE探針：去除細(xì)胞培養(yǎng)基上清，加入用無血清培養(yǎng)液稀釋好的 DHE 探針（推薦探針終濃度為 10 μM），加入探針的體積以能蓋住細(xì)胞為宜，通常 6 孔板單孔不少于 500 μl。

2. 37℃孵育細(xì)胞10-90分鐘。通常情況下，10-30 分鐘即可。

注意：孵育時(shí)間長(zhǎng)短與細(xì)胞類型、刺激條件、DHE 濃度等有關(guān)。可以每隔 5min 顛倒混勻一下，使探針與樣本充分接觸。

3. 棄去上層培養(yǎng)液，用無血清培養(yǎng)液或0.01M PBS反復(fù)吹打，使細(xì)胞層全部進(jìn)入PBS或培養(yǎng)液中。

4. 收集細(xì)胞懸液，用 0.01M PBS 或無血清培養(yǎng)液洗滌 2 次，去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，1000rpm，離心5min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀，用PBS緩沖液洗滌2次，重懸細(xì)胞。

5. 進(jìn)行熒光檢測(cè)，以熒光度數(shù)值表示結(jié)果。

二、動(dòng)物組織樣本