Sephadex LH20簡(jiǎn)介
全稱為：羥丙基葡聚糖凝膠。常用商品凝膠的一種（另一種為交聯(lián)葡聚糖凝膠Sephadex G)。Sephadex LH-20為Sephadex G-25（葡聚糖凝膠按交聯(lián)度分類的其中一種商品型號(hào)）經(jīng)羥丙基化處理后得到的產(chǎn)物，此時(shí)，葡聚糖凝膠分子中的葡萄糖部分將與羥丙基結(jié)合成下列醚鍵形式： -OH → -OCH2CH2CH2OH
與Sephadex G比較，Sephadex LH-20分子中 -OH 基總數(shù)雖無改變，但碳原子數(shù)所占比例卻相對(duì)增加了，所以Sephadex LH-20不僅可在水中應(yīng)用，也可在極性有機(jī)溶劑或他們與水組成的混合溶劑中膨潤(rùn)使用。
Sephadex LH20是一種價(jià)錢較高的填料，特點(diǎn)： 1、適合用有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子，可以非常經(jīng)濟(jì)地大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物 2、結(jié)合凝膠過濾、分配色譜及吸附性層析于一身，分離結(jié)構(gòu)非常相近的分子 3、載量可高達(dá)300mg樣品/ml凝膠，極少需要再生，分離效果可保持十幾年不變。
ephadex LH20 的原理
Sephadex LH20的分離原理是根據(jù)分子大小，主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）。因?yàn)槟z過濾作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脫下來，小分子的化合物保留強(qiáng)，最后出柱（具體原理可參見分子篩層析）。如果使用反相溶劑洗脫， Sephadex LH20對(duì)化合物還起反相分配的作用，所以極性大的化合物保留弱，先被洗脫下來，極性小的化合物保留強(qiáng)，后出柱。如果使用正相溶劑洗脫，這主要靠凝膠過濾作用來分離。
Sephadex LH20 洗脫溶劑
Sephadex LH20 洗脫溶劑因分為兩類：反相和正相兩種。經(jīng)常用的是反相溶劑洗脫，以甲醇/水系統(tǒng)為常見，先用水，逐漸增加甲醇比例，最后用100%甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以氯仿/甲醇為較常見，先用50%氯仿/甲醇，逐漸增加甲醇比例，最后用100%甲醇沖柱。
樣品的處理和洗脫溶劑的選擇
如果樣品極性大，就選用反相溶劑洗脫（甲醇/水），樣品用最少體積的甲醇/水（盡可能甲醇少一些）溶解，過濾后，濕法上樣（一定要濾喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得將Sephadex LH20 的柱頭部分棄去，很心痛呀）。如果樣品極性小，這選用正相溶劑洗脫（氯仿/甲醇），樣品用最少體積的氯仿/甲醇溶解，過濾后，濕法上樣。
分離的技巧
（1） 分離時(shí)流速不可太快，切切不可心急，所謂欲速則不達(dá)；接餾分時(shí)可開全速，節(jié)省時(shí)間。
（2）柱子盡可能長(zhǎng)， Sephadex LH20 柱長(zhǎng)的增加將極大地改善分離，所不要吝惜填料，寧可將填料全裝在一根大柱子中，不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢(shì)兵力，打擊敵人。
（3） 餾分一定要接的細(xì)，可1/10，或1/20 個(gè)保留體積接成一餾分。
（4） 洗脫體積一般為2-3個(gè)保留體積，對(duì)特殊保留強(qiáng)的化合物，可洗脫5個(gè)保留體積。
（5）鞣質(zhì)成分死吸附嚴(yán)重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣質(zhì)
（6）Sephadex LH20 對(duì)黃酮類成分的分離效果極佳，方法很成型，有大量文獻(xiàn)參考。
（7）填料反復(fù)使用，每次用完，一般可用甲醇將柱子洗干凈，然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來，待用。暫時(shí)不用試可以水洗→含水醇洗（醇的濃度逐步遞增）→醇洗，最后泡在醇中貯于磨口瓶中備用。如長(zhǎng)期不用時(shí)，可在以上處理基礎(chǔ)上，減壓抽干，再用少量乙醚洗凈抽干，室溫充分揮散至無醚味后，60～80°C干燥后保存。
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